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沉默脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因对脂肪细胞合成甘油三

【作者】 吴洁 ; 钟敏 ; 邹瑾

【关键词】 RNA干扰 脂细胞 脂肪酸结

摘要】目的 应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对3T3-L1脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)的microRNA表达载体,研究沉默A-FABP基因的表达对脂肪细胞合成甘油三酯及脂联素分泌的影响。方法 构建靶向A-FABP基因的microRNA表达载体转染3T3-L1脂肪细胞后,RT-PCR及Western blot法检测A-FABP mRNA及蛋白表达。建立A-FABP基因沉默细胞模型,0.5 mmol/L游离脂肪酸和成熟脂肪细胞共孵育24 h,分为对照组、脂肪酸组、RNAi组、RNAi+脂肪酸组。ELISA法分别检测甘油三酯及脂联素水平,RT-PCR法检测脂肪细胞A-FABP及脂联素mRNA的表达。结果microRNA表达载体转染脂肪细胞后,能显著抑制A-FABP mRNA和蛋白表达。随着脂肪酸浓度的升高,脂肪细胞甘油三酯合成明显增加,脂联素分泌明显减少(P〈0.05)。与对照组和脂肪酸组比较,RNAi组和RNAi+脂肪酸组甘油三酯水平明显降低,脂联素水平明显升高,脂联素mRNA表达明显上调(P〈0.05)。结论阻断A-FABP基因有可能成为防治动脉粥样硬化及糖尿病的新靶点。

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