CD137-CD137配体对巨噬细胞基质金属蛋白酶9及血管平滑肌细胞钙化形成的影响

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【作者】徐煜耿田欣臧光耀李波杨萍邵晨王中群严金川

【关键词】抗原 CD137; 巨噬细胞; 基质金属蛋白酶9; 肌细胞平滑肌;

【摘要】目的探讨CD137-CD137配体（CD137L）信号是否通过调控巨噬细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达影响血管平滑肌细胞（VSMC）钙化形成。方法采用巯基乙酸盐腹腔灌洗法获取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞（PM）,采用组织块贴壁法取3～6代胸主动脉VSMC分为对照组、共培养组、CD137激动组和MMP-9抑制组（n=3）。对照组用重组CD137L蛋白干预VSMC,共培养组用PM和VSMC共培养,CD137激动组和MMP-9抑制组分别用重组CD137L蛋白和MMP-9抑制剂干预PM后,与VSMC共培养,再加入重组CD137蛋白（10μg/ml）干预。采用Western blot检测各组钙化相关的骨桥蛋白（OPN）、Runt相关转录因子2（Runx-2）表达,微板法检测钙离子浓度和碱性磷酸酶（ALP）活性,Von Kossa和茜素红染色检测各组细胞钙化程度。结果 CD137激动组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显高于共培养组（P<0.01）,而MMP-9抑制组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显低于CD137激动组,差异有统计学意义[0.25±0.27 vs 2.12±0.34,0.30±0.32 vs 2.63±0.41,（1.92±0.09）mmol/g vs（4.99±0.37）mmol/g,（1.11±0.50）KU/g vs（2.63±0.04）KU/g,P<0.01]。共培养组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性与对照组比较,无统计学意义（P>0.05）。CD137激动组茜素红染色红色颗粒物质沉积和Von Kossa染色黑色颗粒物质沉积明显多于对照组和共培养组;MMP-9抑制组钙化程度显著降低;对照组和共培养组钙化程度则无明显差异。结论 CD137-CD137L信号可能通过调控巨噬细胞MMP-9表达影响VSMC钙化形成。

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